2V6.11 人胚腎細胞/STR鑒定細胞介紹

這株細胞是2001年從人胚腎細胞株293衍化而來。293細胞用攜帶Zeocin-抗性標記的質粒pVgRXR轉染得到293pVgRXR細胞。隨后,用包含編碼E424K的Ad5E4ORF6基因的質粒pEKORF6轉染。pEKORF6從包含潮霉素抗性基因的質粒pIndHydro衍生而來。載體包含SV40病毒序列。

2V6.11細胞株初從含潮霉素的培養液中用克隆環分離單克隆得到。2V6.11細胞誘導表達的人腺病毒E434KDa蛋白可通過免疫印跡法檢測。這株細胞可以用作研究腺病毒E4癌基因的工具。

細胞特性
1） 來源：人胚胎腎臟
2） 形態：上皮細胞樣，貼壁生長
3） 含量：>1x106 個/mL
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發現污染，請及時拍照與我們聯系。

細胞用途：僅供科研使用。

2V6.11 人胚腎細胞/STR鑒定接收后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查發貨培養瓶的狀況，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。
2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態時，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態的依據。
3） 觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。
4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現象，如發現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基的原培養瓶中（或新的培養瓶中）。
5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基）。
6）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。  收到細胞后di一次傳代建議1：2傳代 。

                     
細胞培養步驟
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備MEM（推薦iCell-0012）培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗 1%
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%FBS，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量*培養基終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1:5比例分到新的含6ml培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為類；

1，細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入1ml*培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。
3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點（上海）細胞技術有限公司主要產品和技術服務：

一、原代細胞服務
      各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源；
      多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源；
      原代細胞分離和培養相關試劑、kit、培養基添加劑等；
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二、細胞株/系服務
      細胞株/系培養、增殖、凍存和相關說明書；
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