NIH/3T3 小鼠胚胎細胞/鏡像綺點（iCell）介紹

與原始的隨機交配3T3和近交系BALB/c 3T3建株方法一樣，NIH/3T3，是從NIH Swiss小鼠胚胎培養物中建立的高度接觸抑制的連續細胞株。為了培育在形態學特征上更適合于進行轉化分析的亞株，建立的NIH/3T3細胞株又進行了五輪以上亞克隆。這株細胞對DNA轉化及轉染研究十分有用。檢測表明肢骨發育畸形病毒(鼠痘)陰性。

NIH/3T3 小鼠胚胎細胞/鏡像綺點（iCell）特性

1） 來源：胚胎
2） 形態：成纖維細胞，貼壁生長
3） 含量：>1x106 個/mL
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式：

（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發現污染，請及時拍照與我們聯系。

細胞用途：僅供科研使用。

細胞接受后的處理：

1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。

2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。

3） 棄去T25瓶中的培養基，添加6ml新的*培養基。

4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。

5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。

細胞培養步驟

一．培養基及培養凍存條件準備：

1） 準備；DMEM+10%小牛血清+1%P/S+1%neaa+1%丙酮酸鈉+1%谷氨酰胺
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

注：di一次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據客戶需要自己決定。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為類；

1，細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點（上海）細胞技術有限公司主要產品和服務介紹：

        一、原代細胞服務：
               各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源
               多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源
               原代細胞分離和培養相關試劑、kit、培養基添加劑等
               原代細胞相關技術服務及整體實驗外包服務

        二、細胞系服務：
               細胞株/系培養、增殖、凍存和相關說明書
               細胞系培養過程的技術指導
               細胞系培養基、添加劑、血清及相關生長因子、試劑等

        三、iPS細胞服務：
               iPS細胞基礎培養（有滋養層or無滋養層）
               iPS細胞增殖及冷凍保存
               iPS基礎培養技術實習
               新藥及實驗儀器上市前評估

        四、其他技術外包服務、客戶定制服務等

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