產(chǎn)品名稱：Nextera DNA Library Prep Kit (24 samples)

（附推廣：Service（服務(wù)類）相關(guān)產(chǎn)品，如有需求，請(qǐng)?jiān)谕莆闹胁樵?；更多產(chǎn)品，歡迎咨詢）

產(chǎn)品貨號(hào)：FC-121-1030

（對(duì)于全基因組測(cè)序，Nextera DNA Flex文庫制備試劑盒是Nextera DNA文庫制備試劑盒的推薦替代品，該試劑盒已停產(chǎn)。如果您使用的是用于ATAC-Seq或其他定制應(yīng)用的Nextera DNA文庫制備試劑盒，歡迎你的咨詢）

產(chǎn)品賣點(diǎn)：

較快較簡(jiǎn)單的文庫制備流程。制備全基因組測(cè)序文庫不到90分鐘，而手工操作不到15分鐘。
借助Nextera技術(shù)，在一個(gè)步驟中利用轉(zhuǎn)座酶將DNA同時(shí)片段化并加上測(cè)序接頭進(jìn)行標(biāo)記。此操作流程適用于數(shù)量有限的珍貴樣本，只需要50 ng的起始DNA。

這款試劑盒提供較快較簡(jiǎn)單的操作流程，90分鐘就可以構(gòu)建好上及測(cè)序的文庫，手動(dòng)操作的時(shí)間少于15分鐘。一步即可完成片段打碎和連接接頭的步驟，不需要特殊設(shè)備，實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)設(shè)備即可完成整個(gè)文庫構(gòu)建。并且建好的文庫可以適用于illumina的任何測(cè)序平臺(tái)。

采用Nextera技術(shù)，一步即可完成片段打碎和連接接頭的步驟，不需要特殊設(shè)備，實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)設(shè)備即可完成整個(gè)文庫構(gòu)建。較適合樣本量極其稀少的珍貴樣本進(jìn)行建庫，這種建庫方法只需要50ng的建庫起始量。并且可以在任何illumina測(cè)序設(shè)備上進(jìn)行測(cè)序。

Nextera建庫試劑盒還需要配合使用TruSeq Dual Index Sequencing Primer Box（FC-121-1003單端/PE-121-1003雙端），不論是單端測(cè)序還是雙端測(cè)序，不論是否有index，還是單端或雙端index，這個(gè)試劑盒都是必須的。

另外 Nextera Index kit (FC-121-1011 or FC-121-1012)對(duì)于Nextera文庫構(gòu)建也是必需的。不論是混合多少樣本在一個(gè)pooling中。

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紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司

產(chǎn)品名稱：illumina Nextera DNA文庫制備試劑盒 (24 samples)         產(chǎn)品貨號(hào)：FC-121-1030

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DNA文庫制備試劑盒類：

品牌                產(chǎn)品貨號(hào)          產(chǎn)品名稱

illumina品牌        FC-131-1096        Nextera XT DNA Library Preparation Kit (96 samples)文庫制備試劑盒

illumina品牌        FC-131-1024        Nextera XT DNA Library Preparation Kit (24 samples)文庫制備試劑盒

illumina品牌        FC-126-1001        TruSeq Synthetic Long-Read DNA Library Prep Kit (4 samples)文庫制備試劑盒

illumina品牌        FC-121-9999        TruSeq FFPE DNA Library Prep QC Kit (24 samples)文庫制備試劑盒

illumina品牌        FC-121-1031        Nextera DNA Library Prep Kit (96 samples)文庫制備試劑盒

illumina品牌        FC-121-1030        Nextera DNA Library Prep Kit (24 samples)文庫制備試劑盒

illumina品牌        20024895          AmpliSeq for Illumina DNA Library Preparation - Illumina Solutions Centre文庫制備試劑盒

illumina品牌        20023392          AmpliSeq for Illumina®  DNA Library Preparation Kit Training文庫制備試劑盒

Illumina二代測(cè)序技術(shù)，邊合成邊測(cè)序（SBS），是廣泛采用的新一代測(cè)序（NGS）技術(shù)，負(fù)責(zé)產(chǎn)生世界上90％以上的測(cè)序數(shù)據(jù)。

Illumina的二代測(cè)序技術(shù)稱為邊合成邊測(cè)序(Sequencing-by-Synthesis,簡(jiǎn)稱SBS)。SBS主要包括堿基延伸、熒光激發(fā)及信號(hào)收集、剪切等3個(gè)步驟。這3個(gè)步驟可以重復(fù)，循環(huán)進(jìn)行。每循環(huán)一次測(cè)定一個(gè)堿基。想測(cè)定多少個(gè)堿基（即讀長(zhǎng)），就循環(huán)多少次。測(cè)序循環(huán)次數(shù)可以在軟件里設(shè)定。到底測(cè)序多長(zhǎng)合適，要根據(jù)項(xiàng)目性質(zhì)和需求來決定。大多數(shù)情況下，SR實(shí)驗(yàn)（單端測(cè)序）測(cè)定1x50個(gè)堿基，PE實(shí)驗(yàn)（雙端測(cè)序）測(cè)定2x150個(gè)堿基。

1 堿基延伸

Illumina測(cè)序試劑里所使用的dNTP特色，它們同時(shí)具有兩個(gè)修飾基團(tuán)：一個(gè)熒光基團(tuán)，一個(gè)可逆終止基團(tuán)。A、G、C、T 4種堿基分別標(biāo)記4種不同的熒光基團(tuán)，它們?cè)诓煌ㄩL(zhǎng)的激光激發(fā)下，能夠發(fā)射不同波長(zhǎng)（即顏色）的熒光。熒光顏色與堿基種類一一對(duì)應(yīng)，因此根據(jù)激發(fā)光的波長(zhǎng)可以識(shí)別堿基。4種堿基的終止基團(tuán)是一樣的。由于終止基團(tuán)的存在，所有dNTP每次都只能延伸1個(gè)堿基，無論給予多長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間。又由于該終止基團(tuán)是可逆的，在熒光信號(hào)收集完畢之后，可以用剪切劑切除該終止基團(tuán)，使堿基恢復(fù)自然的可延伸狀態(tài)，這時(shí)即可繼續(xù)進(jìn)行下一輪循環(huán)，再測(cè)定一個(gè)堿基。

可逆終止基團(tuán)技術(shù)是Illumina二代測(cè)序的一大特色。它與橋式PCR技術(shù)一起，構(gòu)成了Illumina二代測(cè)序的兩大支柱，為穩(wěn)定獲得高質(zhì)量的測(cè)序數(shù)據(jù)打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

2 信號(hào)采集

HiSeq系列測(cè)序儀具有紅綠兩根激光管，兩個(gè)濾色片。它們兩兩組合，可以形成4種不同的激發(fā)波長(zhǎng)，正好分別用于激發(fā)A、G、C、T 4種堿基。

Cluster上所標(biāo)記的熒光基團(tuán)在激光激發(fā)下產(chǎn)生的信號(hào)，可以用相機(jī)拍攝或者掃描的方式收集信號(hào)。掃描技術(shù)速度比較快，被X10系列采用。由于FC面積比較大，而且上表面和下表面要分別拍照，所以拍照過程相當(dāng)耗時(shí)。對(duì)于經(jīng)典的HiSeq 2000來說，一次測(cè)序循環(huán)所產(chǎn)生的熒光信號(hào)，需要大約40分鐘的時(shí)間才能拍照收集完畢，時(shí)間比測(cè)序反應(yīng)本身還要長(zhǎng)。

3 剪切

熒光信號(hào)收集完畢后，關(guān)閉激光，用剪切劑去除測(cè)序引物的延伸產(chǎn)物上的堿基所標(biāo)記的熒光基團(tuán)和終止基團(tuán)。兩個(gè)修飾基團(tuán)均被切除，一方面消去干擾熒光，一方面使鏈末端的堿基回復(fù)到自然的可延伸狀態(tài)，為下一輪測(cè)序做好準(zhǔn)備。

再重復(fù)合成、激發(fā)、收集等步驟，即可進(jìn)行第二個(gè)堿基的測(cè)序。

測(cè)序循環(huán)可以重復(fù)多次。理論上可以一直重復(fù)，直到信噪比降低得無法有效識(shí)別堿基信號(hào)為止。由于熒光基團(tuán)的發(fā)光效率持續(xù)不斷在衰減，Taq酶的活性也在持續(xù)不斷地衰減，所以實(shí)際上測(cè)序循環(huán)次數(shù)是有限的，大重復(fù)次數(shù)與sbs試劑的配方有關(guān)。測(cè)序的循環(huán)次數(shù)可以在軟件設(shè)置過程中人為，這個(gè)重復(fù)次數(shù)就是每個(gè)測(cè)序片段的讀長(zhǎng)。目前，Illumina平臺(tái)的讀長(zhǎng)有2x100 bp，2x125 bp，2x150 bp，2x300 bp等多種，其中2x150 bp用得較廣泛。

附推廣：illumina品牌—Service（服務(wù)類）相關(guān)產(chǎn)品：

品牌                      產(chǎn)品貨號(hào)                    產(chǎn)品名稱

illumina品牌          15071960                 Harness, Rear Service Door Sensor

illumina品牌          20001098                 Infinium® Multi-Ethnic AMR/AFR-8 v1.0 FastTrack Service

illumina品牌          20001108                 Infinium® Multi-Ethnic EUR/EAS/SAS-8 v1.0 FastTrack Service

illumina品牌          20001110                 Infinium Multi-Ethnic Global-8 v1.0 FastTrack Service

illumina品牌          20001111                 Infinium Multi-Ethnic Global-8+ v1.0 FastTrack Service

illumina品牌          20001120                 Infinium Omni2.5-8 v1.3 FastTrack Service

illumina品牌          20001128                 Infinium® OmniExpress-24 v1.2 FastTrack Service

illumina品牌          20004345                 Infinium OmniZhongHua-8 v1.3 FastTrack Service

illumina品牌          20004426                 ILMN-Assisted FGx Validation Service

illumina品牌          20004427                 ILMN Full Standard FGx Validation Service

illumina品牌          20004428                 ILMN Custom FGx Validation Service-Add'l 32 Smp

illumina品牌          20004429                 ILMN Custom FGx Validation Service-Add'l 64 Smp

illumina品牌          20004482                 Infinium Omni5-4 v1.2 FastTrack Service

illumina品牌      SP-201-1007          NeoPrep? Calibration Service

illumina品牌      SR-50-705001-00     BlueGnome professional service (Local)

illumina品牌      SR-50-705002-00     BlueGnome professional services (Regional)

illumina品牌      SR-50-705003-00     BlueGnome professional services (ROW)

illumina品牌      SV-475-1001         Illumina High-Throughput Sequencing Consulting Service

illumina品牌      SV-500-1001         Service Parts and Labor Estimate

illumina品牌      SV-800-1000         Service Contract Upgrade

illumina品牌      TR-203-0021          Instrument Field Service Training

illumina品牌      TR-203-0022          Instrument Field Service Training Recertification

單端測(cè)序：?jiǎn)味藴y(cè)序(Single-read)首先將DNA樣本進(jìn)行片段化處理形成200-500bp的片段，引物序列連接到DNA片段的一端，然后末端加上接頭，將片段固定在flow cell上生成DNA簇，上機(jī)測(cè)序單端讀取序列。

雙端測(cè)序：雙端測(cè)序(Paired-end)方法是指在構(gòu)建待測(cè)DNA文庫時(shí)在兩端的接頭上都加上測(cè)序引物結(jié)合位點(diǎn)，在*輪測(cè)序完成后，去除*輪測(cè)序的模板鏈，用對(duì)讀測(cè)序模塊(Paired-End Module)引導(dǎo)互補(bǔ)鏈在原位置再生和擴(kuò)增，以達(dá)到第二輪測(cè)序所用的模板量，進(jìn)行第二輪互補(bǔ)鏈的合成測(cè)序。

基因測(cè)序是一種新型基因檢測(cè)技術(shù)，能夠從血液或唾液中分析測(cè)定基因全序列，預(yù)測(cè)罹患多種疾病的可能性，個(gè)體的行為特征及行為合理?；驕y(cè)序技術(shù)能鎖定個(gè)人病變基因，提前預(yù)防和治療。

基因測(cè)序相關(guān)產(chǎn)品和技術(shù)已由實(shí)驗(yàn)室研究演變到臨床使用，可以說基因測(cè)序技術(shù)，是下一個(gè)改變世界的技術(shù) 。

基因測(cè)序只是基因檢測(cè)的方法之一，其又叫基因譜測(cè)序，是上*的一種基因檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

基因測(cè)序廣為人知的還有針對(duì)唐氏綜合征篩查的無創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)。只需要采集孕婦的外周血，通過對(duì)血液中游離DNA(包括胎兒游離DNA)進(jìn)行測(cè)序，并將測(cè)序結(jié)果進(jìn)行生物學(xué)分析，從而得出胎兒是否患有染色體數(shù)目異常的疾病，包括常見的21-三體綜合征(唐氏綜合征)、18-三體綜合征(愛德華氏綜合征)和13-三體綜合征(Patau綜合征)。

基因組文庫是指將某生物的全部基因組DNA切割成一定長(zhǎng)度的DNA 片段克隆到某種載體上而形成的集合?；蚪M文庫根據(jù)DNA 來源又分為核基因組文庫、葉綠體基因組文庫及線粒體基因組文庫。基因組文庫構(gòu)建時(shí)遺傳信息供體是基因組DNA,因而無發(fā)育時(shí)期及組織器官特異性，在一個(gè)*的基因組文庫中包含著基因組DNA 上的所有編碼區(qū)及非編碼區(qū)序列的克隆; 生物有機(jī)體的每一個(gè)基因在文庫中都有其克隆，該克隆的基因片段里包括著間隔序列，所以基因組文庫可真實(shí)地顯示基因組的全部結(jié)構(gòu)信息。

基因組文庫(Genomic Library)定義:把某種生物基因組的全部遺傳信息通過克隆載體貯存在一個(gè)受體菌克隆子群體中，這個(gè)群體即為這種生物的基因組文庫。

cDNA文庫：以mRNA為模板，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶催化，在體外反轉(zhuǎn)錄成cDNA，與適當(dāng)?shù)妮d體(常用噬菌體或質(zhì)粒載體)連接后轉(zhuǎn)化受體菌，則每個(gè)細(xì)菌含有一段cDNA，并能繁殖擴(kuò)增，這樣包含著細(xì)胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合稱為該組織細(xì)胞的cDNA文庫。cDNA文庫特異地反映某種組織或細(xì)胞中，在特定發(fā)育階段表達(dá)的蛋白質(zhì)的編碼基因，因此cDNA文庫具有組織或細(xì)胞特異性。

cDNA文庫是以特定的組織或細(xì)胞mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄形成的互補(bǔ)DNA(cDNA)與適當(dāng)?shù)妮d體(常用噬菌體或質(zhì)粒載體)連接后轉(zhuǎn)化受體菌形成重組DNA克隆群，這樣包含著細(xì)胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合稱為該組織或細(xì)胞的cDNA文庫。cDNA文庫特異地反映某種組織或細(xì)胞中，在特定發(fā)育階段表達(dá)的蛋白質(zhì)的編碼基因，因此cDNA文庫具有組織或細(xì)胞特異性。

cDNA文庫顯然比基因組DNA文庫小得多，能夠比較容易從中篩選克隆得到細(xì)胞特異表達(dá)的基因。但對(duì)真核細(xì)胞來說，從基因組DNA文庫獲得的基因與從cDNA文庫獲得的不同，基因組DNA文庫所含的是帶有內(nèi)含子和外顯子的基因組基因，而從cDNA文庫中獲得的是已經(jīng)過剪接、去除了內(nèi)含子的cDNA。

真核生物基因組DNA十分龐大,其復(fù)雜程度是蛋白質(zhì)和mRNA的100倍左右,而且含有大量的重復(fù)序列. 采用電泳分離和雜交的方法,都難以直接分離到目的基因.這是從染色體DNA為出發(fā)材料直接克隆目的基因的一個(gè)主要困難。

高等生物一般具有10^5種左右不同的基因,但在一定時(shí)間階段的單個(gè)細(xì)胞或個(gè)體中,都僅有15%左右的基因得以表達(dá),產(chǎn)生約15000種不同的mRNA分子.可見,由mRNA出發(fā)的cDNA克隆,其復(fù)雜程度要比直接從基因組克隆簡(jiǎn)單得多。

cDNA文庫在研究具體某類特定細(xì)胞中基因組的表達(dá)狀態(tài)及表達(dá)基因的功能鑒定方便具有特殊的優(yōu)勢(shì)，從而使它在個(gè)體發(fā)育、細(xì)胞分化、細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞衰老和死亡調(diào)控等生命現(xiàn)象的研究中具有更為廣泛的應(yīng)用價(jià)值，是研究工作中較常使用到的基因文庫。

產(chǎn)品名稱：illumina Nextera DNA文庫制備試劑盒 (24 samples)         產(chǎn)品貨號(hào)：FC-121-1030

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