產品名稱：EZ細胞及動物組織RNA直擴RT-PCR試劑盒（一步法）

英文名稱：EZ Cell and Tissue RNA Direct PCR Kit（One Step)

產品規格：30T/100T

產品報價：1200元/3000元

試劑盒應用：細胞組織或細胞基因的擴增與克隆、RNA病毒基因的擴增、RNA病毒PCR診斷、RNA病毒Real-time PCR.。

試劑盒組成：RNA-EZ-1、RNA-EZ-2、RNA-EZ-3、RNA-EZ-4、RT-Enzyme、2*RT-Buffer、ddH2O

保存條件：-20oC保存。使用前將RNA-EZ-1、RNA-EZ-4在室溫或37oC充分溶解。RNA-EZ-3、RNA-EZ-4和RT-Enzyme使用時需置于冰上。

使用方法：

細胞中RNA的擴增

（1）將6ul RNA-EZ-1與3ul RNA-EZ-2充分融合。

（2）取20ul細胞懸液（10^5-10^6cells/ml）,加入上述混合液，混勻。

（3）置于37oC靜置10分鐘。

（4）加入1ul RNA-EZ-3，混勻。

（5）置于37oC靜置15分鐘。

（6）置于98oC加熱5分鐘。

（7）加入60ul的RNA-EZ-4，混勻。

（8）取2ul（7）中處理液進行RT-PCR擴增。

組織塊中RNA的擴增

（1）用 H2O 將 RNA-EZ-1 稀釋 5 倍，每 25 μL 的 RNA-EZ-1 稀釋液中加入 3 μL 的 RNA-EZ-2，混合均勻。同時處理多個組織塊時，可以按照以上比例配制預混液并分裝到每個離心管 26 µL。

（2）切取半顆米粒大小的組織塊（< 3 mm3），*浸入上述混合液中。

（3）置于 37oC 靜置 10 分鐘。

（4）加入 1µL RNA-EZ-3，混勻。

（5）置于 37oC 靜置 15 分鐘。

（6）置于 98oC 加熱 5 分鐘。

（7）加入 60 μL RNA-EZ-4，混勻。

（8）取 2 μL（7）中處理液進行 RT-PCR 擴增。

Real-Time PCR

取上述細胞或組織處理液，加入特異性引物和 TaqMan 探針，可進行特異性靶標 RNA 的定

量檢測。如需進行 SYBR Green Real-time PCR，請選擇 EZ021-01/-02（EZ® Cell and Tissue RNA Direct

PCR Kit（One Step)）。

在 RNase free 的離心管中配制 PCR 反應體系

按照以下方法設定 PCR 反應

EZ細胞及動物組織RNA直擴RT-PCR試劑盒注意事項

（1）取樣的細胞量應當適中，濃度不宜過高或過低，處理后溶液應當以透明為宜。

（2） 樣品處理過程中應當防止交叉污染，推薦設置陰性對照參與處理過程，以檢測環境的污染。

（3）用本產品擴增的 RNA 不宜太長，1000bp 及以內的片段較佳，前期研究中可擴增長達 1800bp的片段，擴增片段越長效率越低。擴增的成功率也與 RNA 的豐度、二級結構以及引物等有關。

（4）本產品同樣適用于相應的細胞或組織中 RNA 病毒的 PCR、Real-Time PCR 診斷。

（5）2×RT-Buffer 中加入了染料和相應試劑，可直接進行電泳，無需另加 Loading buffer。

（6）處理 96 孔板中的細胞時，可按照 ddH2O:RNA-EZ-1:RNA-EZ-2=20:5:3 的比例配制預混液，使用多道移液器直接加入 96 孔板經 DPBS 洗滌的細胞中，實現高通量操作。

（7）2×RT-Buffer 中的染料不影響 TaqMan 探針的效果。

細胞中RNA病毒短片段的擴增。取不同病毒感染的細胞20ul，用EZ020試劑盒進行直擴RT-PCR，均可穩定獲得目的產物。

細胞中RNA病毒短片段的擴增。取不同病毒感染的細胞20ul，用EZ020試劑盒進行直擴RT-PCR，可擴增長達1800bp的RNA片段。

細胞中不同長度的RNA片段的擴增。取20ul BHK-21細胞，用EZ020試劑盒進行直擴RT-PCR，可穩定擴增各種長度的RNA片段。

同類型產品對比。用本產品、N公司以及T公司同類產品擴增某動脈炎病毒的RNA片段，發現本產品與同類產品相比具有較高的擴增效率。