代做免疫印跡Western Blotting實驗，代做WB實驗
預實驗免費！常用抗體免費！保證質量，實驗結果滿意才支付尾款！
Western Blot標準protocol
成功完成Western Blot檢測，必須滿足4個條件：

1. 凝膠洗脫：轉移期間蛋白質必須從凝膠中洗脫出來，如果蛋白質還截留在凝膠中，將無法在膜上進行分析
2. 吸附到膜上：在轉移過程中蛋白質必須吸附到膜上，如果蛋白不吸附，將無法在膜上進行分析
3. 處理期間仍截留在膜上：在轉移后的處理過程中蛋白質必須保持吸附在印跡膜上
4. 處理過程中可接近：被吸附的蛋白質必須能夠與檢測試劑接觸，如果蛋白質被掩蓋則無法檢測

成功進行WB檢測，則設置合適正確的對照是*的，只要正確設置了這些對照，即可快速和準確的找到WB的問題所在，并保證實驗結果的準確性和特異性！一般需要設置的對照如下：

• 陽性對照：明確表達檢測蛋白的組織或細胞，用于檢測抗體的工作效率
• 陰性對照：明確不表達檢測蛋白組織或細胞，用于檢測抗體的特異性
• 二抗對照：不加一抗，用于檢測二抗的特異性
• 內參對照：檢測標本的質量和二抗系統(tǒng)
• 空白對照：不加一抗和二抗；用于檢測膜的性質和封閉的效果

WB檢測基本過程
1、獲取細胞或組織裂解物
1)根據(jù)檢測蛋白的位置選擇合適的裂解buffer：

亦可購買商業(yè)化的蛋白提取試劑盒來保證標本制備的質量
2)選擇合適的蛋白酶抑制劑，避免蛋白降解，從而保證檢測的準確性！
2、蛋白定量
常用的蛋白定量方法：Bradford assay, Lowry assay 或BCA assay。定量后，可根據(jù)情況將標本保存在-20°C /-80°C備用，進行免疫沉淀（IP）或者直接進行電泳分離蛋白
3、電泳分離蛋白質
根據(jù)待測蛋白狀態(tài)確定電泳條件：

根據(jù)待測蛋白分子量大小確定凝膠濃度

4、轉膜
根據(jù)不同的檢測目的和待測蛋白的特性，選擇合適的膜類型。常用的轉移膜類型有：PVDF膜、硝酸纖維素膜（NC膜）和尼龍膜，其中PVDF和NC膜的使用頻率zui高。各種膜的技術參數(shù)及比較如下：

5、封閉
去掉膜上多余的非特異性結合位點，降低背景。常用的封閉溶液有：含BSA或者脫脂奶粉的TBST或TBS
6、一抗孵育
一抗的選擇成功與否，是整個WB實驗成功的關鍵：選擇一抗有以下幾個注意點：

• 選擇適合檢測標本種屬的一抗（說明書有驗證）
• 選擇適用于WB實驗方法的一抗（說明書有驗證）
• 選擇單克隆抗體或者經(jīng)過親和純化的多克隆抗體

一抗的保存和使用：

• 根據(jù)說明書的要求條件進行抗體的保存；一般需要將抗體分裝后放入-20度保存，避免反復凍融。
• 抗體的工作液現(xiàn)配現(xiàn)用，在4度保存不要超過2周
• 根據(jù)說明書*濃度使用TBST稀釋一抗。由于實驗室條件和檢測方法等的差異，說明書*的稀釋比例只作參考，需要在說明書*的濃度周邊進行多個濃度梯度的實驗檢測，然后選擇信噪比的抗體濃度進行實驗。如果說明書沒有*濃度，可進行多個稀釋比例進行摸索*稀釋度（1:100-1:3000）。
• 孵育條件：*4°C孵育（一般大于18個小時），根據(jù)抗體親和力不同孵育時間有所區(qū)別

內參的選擇和使用：WB過程監(jiān)測以及目的蛋白定量的標準！
WB常用內參及其技術參數(shù)：

7、二抗孵育
根據(jù)說明書*濃度使用TBST稀釋一抗。如果說明書沒有*濃度，可進行多個稀釋比例進行摸索*稀釋度（1:1000-1:20000）。孵育條件一般為室溫1-2小時
8、底物孵育
選擇顯色或者化學發(fā)光底物。一般傾向于化學發(fā)光，靈敏度高且背景低，節(jié)省抗體用量
9、結果分析和檢測
凝膠成像系統(tǒng)檢測或者暗室曝光到膠片
Note：從封閉開始，每步之間都需要用TBST進行洗滌，3次，每次5min


客戶注意事項

1.標本收集與保存
組織樣品：新鮮組織放入液氮或-80度保存，組織不少于100mg（約綠豆大小）；
培養(yǎng)細胞：通過細胞計數(shù)取不少于2000000個細胞于EP管，加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護劑，混勻后保存于冰箱（-80℃，避免反復凍融）；
血液細胞標本：以抗凝管保存血樣或以淋巴細胞分離液分離細胞后加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護劑，保存（-80℃可*保存，避免反復凍融）
血清或細胞培養(yǎng)液標本：離心去掉雜質后取上清入EP管，保存（以上4℃可保存15-20天，-80℃可*保存，避免反復凍融）

2.樣本運輸：可選以下任何的一種方式寄送標本
組織樣本、細胞樣本使用干冰覆蓋后通過泡沫盒運輸；
細胞樣本也可以直接常溫寄送細胞培養(yǎng)瓶（parafilm密封瓶口保證不污染，培養(yǎng)液不外漏，細胞不必長得太滿，50%左右即可，灌滿培養(yǎng)液）；

以上樣本快遞，視路途遠近2-3天可到達。

上海維景生物科技有限公司是一家專注生命科學領域的企業(yè)，借助中科院細胞與免疫學實驗平臺，擁有強大的資金背景支持和專業(yè)的團隊等資源。公司面向全國市場，迅速發(fā)展，廣納英才，現(xiàn)已建成專業(yè)生命科學產(chǎn)品銷售團隊，其中大部份是在生命科學市場上工作多年，有豐富的銷售經(jīng)驗，也有良好的客戶資源，銷售渠道全面覆蓋華東大部分工業(yè)以及科研客戶，團隊中免疫學及相關專業(yè)碩士以上學歷人士達50%，有較強的能力，在針對專業(yè)技術服務中能夠提供完善周到的專業(yè)化服務，對客戶在使用產(chǎn)品過程中提出的問題能滿意答復，并可及時傳遞的產(chǎn)品技術資料信息。　　

上海維景生物是一家面向全國以專業(yè)從事免疫學實驗服務外包和免疫學試劑代理銷售為主的*。公司的服務對象主要為醫(yī)藥科研人員、大型制藥公司等。

公司專注開展以下五種免疫學實驗服務：免疫印跡（Western Blotting）、免疫組織化學（IHC）、免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)、染色質免疫共沉淀(ChIP) 。保證實驗質量，客戶滿意后才收取尾款。

同時公司還是美國CMCTAG品牌的全國*總代理，CMCTAG公司產(chǎn)品專注于標簽抗體、內參抗體及標簽抗體偶聯(lián)beads這一領域。其開發(fā)的標簽抗體偶聯(lián)agarose beads（affinity gel）在科研以及臨床研究中享有很高的聲譽，更借助CMCTAG在標簽抗體、內參抗體領域的優(yōu)勢，成為免疫印跡WB和免疫沉淀IP實驗試劑的專業(yè)供應商。因的產(chǎn)品質量及良好的客戶口碑，CMCTAG敢于執(zhí)行倒賠政策，抗體承諾客戶不滿意即可申請無條件全額退款，如若產(chǎn)品質量證實有瑕疵，則除了無條件全額退款以外，還會倒賠客戶一定金額。

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