Esp3I 限制性內切酶

產品貨號：F1503S

儲存條件：-20℃

同裂酶：BsmBI, BstGZ53I, Esp16I, Esp23I

注： 同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性

產品組成

產品簡介

LabFD™快速內切酶是一系列經過基因工程重組、能夠在 5~15 分鐘內精確完成 DNA 切割的高保真限制性內切酶，適用于質粒DNA、PCR 產物或基因組DNA 等的快速酶切。LabFD™快速內切酶具有如下特點：5~15 分鐘內即可完成酶切；共用一種酶切 Buffer，大大簡化酶切反應體系；良好的酶活冗余度， 輕松應對底物過量或困難模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、連接試劑在 LabFD™酶切 Buffer 中具有100%活性，支持一管化反應，提升“酶切-修飾-連接”的體驗。

建議反應條件

1×LabFD™緩沖液；37℃溫育；參照“DNA 快速酶切流程”配制反應體系。

失活條件

80℃溫育 20 min。

功能活性檢測

最適反應溫度下，在 20ul 反應體系中，1ulLabFD™ Esp3I 能夠在 15min 內消化 1ug λDNA。

超長時間溫育檢測

最適反應溫度下，將 1ul LabFD™ Esp3I 與 1ug λDNA 共同溫育 3h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解，延時酶切可能出現星號活性。

酶切-連接-再酶切檢測

最適反應溫度下，使用 1ul LabFD™ Esp3I 消化底物，回收酶切產物。在 22℃下使用適量 Fast T4 DNA Ligase 可以將酶切產物重新連接。將連接產物再次回收后，使用相同的內切酶可以重新切開連接產物。

非特異性內切酶活性檢測

最適反應溫度下，將 1ul LabFD™ Esp3I 與 1ug 超螺旋質粒 DNA 共同溫育 4h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，質粒 DNA 仍然處于超螺旋狀態。

使用方法

1. DNA 快速酶切流程

  （1）在冰上按如下建議的加樣順序配制反應體系：

注：本體系適用于經過純化的 PCR 產物酶切，未純化的 PCR 具備一定的離子強度，10xLabFDTMbuffer 加入量可適當減少至2ul。但由于DNA 聚合酶同時具有外切酶活性，會影響酶切產物，因此如下一步需進行克隆等操作，建議酶切前對PCR 產物進行純化。

  （2） 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴；

（3）37℃溫育 15min（質粒），或 15~30min（PCR 產物），或 30~60min（基因組 DNA）；

（4）80℃溫育 20min 即可使酶失活，停止反應（可選）。

2. 雙酶切或多酶切

  （1） 每種快速內切酶的用量為 1ul，并根據需要適當擴大反應體系；

  （2） 所有快速內切酶的體積總和不得超過總反應體系的 1/10；

（3） 如果所用的幾種快速內切酶的最適反應溫度不同，應先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶，在其最適反應溫度下進行酶切反應。

3. 適用于質粒的擴大反應體系

注：如果總反應體系大于 20ul，應適當增加溫育時間，盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。

不同 DNA 中的酶切位點數量

甲基化修飾影響

在不同反應緩沖液中的活性

注：活性數據來自LABLEAD 限制酶標準反應體系下的檢測。