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上海惠誠(chéng)生物推出新品磁珠法質(zhì)粒DNA大量抽提試劑盒(90-100mL)

【貨號(hào)】

HA31015

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

磁珠法質(zhì)粒DNA大量抽提試劑盒 (90-100mL)

【規(guī)格】

2次

【產(chǎn)品描述】

本試劑盒可應(yīng)用于對(duì)大量菌液進(jìn)行質(zhì)粒DNA抽提。試劑盒采用高性能納米磁珠和特殊緩沖液系統(tǒng)。磁珠在一定條件下對(duì)質(zhì)粒DNA具有極(空格)強(qiáng)的親和力，當(dāng)條件改變時(shí)可以可逆的釋放質(zhì)粒DNA，從而達(dá)到分離純化質(zhì)粒DNA的效果。整個(gè)操作過(guò)程簡(jiǎn)便、快速。本產(chǎn)品可最大限度的去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，保證提取所得質(zhì)粒DNA的純度，所得質(zhì)粒DNA產(chǎn)物可直接應(yīng)用于酶切、測(cè)序、文庫(kù)篩選、連接和轉(zhuǎn)化等各種下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

推薦每次菌液使用量：高拷貝質(zhì)粒推薦使用量為50ml，低拷貝質(zhì)粒推薦使用量為100ml。

本試劑盒可在EP管中進(jìn)行手動(dòng)法操作，或者與自動(dòng)化核酸提取儀配合使用實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化高通量操作。

【試劑盒組成】

【貯存條件】

 【實(shí)驗(yàn)步驟】

一、試劑準(zhǔn)備

1、  將組分⑦RNase A酶溶液取出2uL加入組分①P1 buffer中，混勻，放置4℃保存?zhèn)溆茫?/p>

2、  在組分⑤Binding buffer中加入135mL無(wú)水乙醇，混勻，室溫保存?zhèn)溆茫?/p>

3、  在組分⑥Wash buffer中加入512mL無(wú)水乙醇，混勻，室溫保存?zhèn)溆谩?/p>

二、操作步驟

1.  樣品準(zhǔn)備

a)   過(guò)夜培養(yǎng)的菌液，轉(zhuǎn)移至50 mL離心管，在離心機(jī)的水平轉(zhuǎn)子上4000 rpm離心10 min，盡棄上清。

b)   將5 mL P1 Buffer（已加入RNaseA酶溶液）加入至50 mL離心管，菌體充分懸浮。

c)    加5 mL P2 Buffer到已懸浮好的菌液中，緩慢搖動(dòng)混合均勻（不能劇烈震蕩），進(jìn)行裂解。操作時(shí)間不能超過(guò)5min，防止基因組污染。

d)   再向裂解體系中加入7 mL P3 Buffer，緩慢搖動(dòng)混合均勻（不能劇烈震蕩），出現(xiàn)絮狀物沉淀。

e)    將中和后的50 mL離心管在離心機(jī)的水平轉(zhuǎn)子上4000 rpm離心20 min。

f)    取出離心后的50 mL離心管，轉(zhuǎn)移14 mL上清至新的50 mL離心管中。

2.  質(zhì)粒抽提

a)    添加2.5 mL磁珠至上述新的50 mL離心管中，完成后再加入16.5 mL的Binding buffer（已加無(wú)水乙醇）至新的50 mL離心管中。

b)    放置旋轉(zhuǎn)架上，孵育10 min。

c)    放置磁力架上，靜置1-2 min，盡棄上清。

d)    加入30 mL Wash buffer（已加無(wú)水乙醇）至新的50 mL離心管中，放置旋轉(zhuǎn)架上，孵育1 min。重復(fù)一次。

e)    放置磁力架上，靜置1-2 min，盡棄上清。

f)    放置37℃培養(yǎng)箱 10 min，直到磁珠中酒精蒸發(fā)完(空格)全。

g)    加入500-1mL無(wú)菌水溶解，孵育3-5 min。

h)    放置磁力架上，靜置1-2 min，轉(zhuǎn)移上清之EP管中。

i)     使用分光光度計(jì)檢測(cè)A260。

【注意事項(xiàng)】

1. 試劑時(shí)間長(zhǎng)可能會(huì)出現(xiàn)沉淀，使用前輕輕搖晃混合均勻。也可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2. 磁珠使用前充分搖勻。RNase保存在-20℃。試劑盒其他成分置于常溫保存。

3. Buffer P1加入后一定要充分懸浮細(xì)菌，要保證看不到結(jié)塊的菌，否則細(xì)菌不易被裂解，質(zhì)粒產(chǎn)量會(huì)顯著下降。

4. Buffer P2是否有沉淀。如有沉淀可用水浴（37℃）加熱溶解，混勻后使用。

5. 基因組污染：Buffer P2和P3加入后輕輕搖晃，防止基因組斷裂。