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DNA和核酸基礎簡單介紹2023/05/08

DNA是生物學世界中兩個所謂的核酸之一，并且比其同核糖核酸。核酸由稱為核苷酸的單元的聚合物組成。每個核苷酸由一個五碳糖，一個磷酸基團和四個富氮堿基之一組成。在DNA中，糖是脫氧核糖，而在RNA中，糖是核糖。而且，盡管DNA核苷酸包含腺嘌呤，胞嘧啶，鳥嘌呤和胸腺嘧啶的四個堿基之一，但是在RNA中，尿嘧啶代替了胸腺嘧啶。DNA是雙鏈的，兩條鏈在每個核苷酸處都被含氮堿基鍵合。腺嘌呤（A）與僅與胸腺嘧啶（T）配對，而胞嘧啶（C）與僅與鳥嘌呤（G）配對。DNA分子之間的差異是造成人與人之間遺傳變異的原因，

簡單介紹大分子化合物有哪些類別2023/05/06

碳水化合物：碳水化合物由單糖（糖）及其聚合物組成。單糖結合在一起形成多糖，多糖是碳水化合物的聚合物。最常見的單糖是葡萄糖，它是所有動植物中最有價值的糖之一。碳水化合物的功能是充當所有生物的存儲和結構的能源。對于植物而言，淀粉是主要能源，纖維素是提供結構和支持的物質。對于動物來說，糖原提供能量，幾丁質提供結構和支持。血脂：脂質有三種形式-脂肪，類固醇和磷脂。這些脂質的主要功能是能量和絕緣。脂肪以飽和或不飽和形式出現，并且不溶，因此具有浮力。飽和脂肪存在于動物體內，在室溫下為固體。不飽和脂肪存在于植

化學鍵基礎的簡單介紹2023/05/05

原子的原子核帶正電，而在原子的物理邊緣周圍游動的電子帶負電，這一事實決定了各個原子彼此相互作用的方式。當兩個原子非?？拷鼤r，無論它們代表什么元素，它們都互相排斥，因為它們各自的電子首先“相遇”，并且負電荷推擠其他負電荷。它們各自的原子核雖然不如它們的電子那么緊密，但也彼此排斥。但是，當原子相距足夠的距離時，它們往往會相互吸引。（離子，正如您很快將看到的，是一個例外；兩個帶正電的離子將始終互相排斥，而對帶負電的離子對則相同。）這意味著在一定的平衡距離處，吸引力和排斥力平衡，并且除非受到其他力的干擾

比色法檢測生物素/蛋白質摩爾質量比2023/04/26

1.吸取900ulHABA/親和素溶液于1ml比色杯。2.測定該溶液在500nm處的吸收值并記錄為“A500HABA/Avidin”。3.吸取100ul生物素標記的蛋白于杯中并測定500nm的吸光度值，記為A500HABA/Avidin/Biotin（數值必須恒定15s以上）如果A500HABA/Avidin/Biotin的值不超過（≤）0.3，重新稀釋待測樣品并檢測。注：計算結果時必須考慮稀釋度。計算Biotin/Protein摩爾比：①A=生物素化的蛋白毫摩爾濃度＝蛋白濃度（mg/ml）/蛋

蛋白提取實驗簡單介紹2023/04/25

常用的方法是使用溶液法進行蛋白質提取（例如RIPA裂解物），但是在蛋白質提取中通常會產生兩種不同的成分，即RIPA可溶性和RIPA不溶性成分。通常，RIPA不溶成分會被我們直接丟棄并忽略。但是有文章證實，丟棄的RIPA不溶成分中存在許多蛋白質。換句話說，通過溶液法提取的總蛋白質不是完整的蛋白質，而只是一些可溶性蛋白質。蛋白質的溶液提取將人工激活caspase-3和caspase-7；它還會人為地激活某些激酶活性；影響磷酸化研究；影響細胞外基質；影響定量，定性蛋白質研究。目前，通過離心柱法提取蛋白

MLR混合淋巴細胞反應實驗簡介2023/04/24

兩個無關個體功能正常的淋巴細胞在體外混合培養時，由于HLAⅡ類抗原中D和DP抗原（淋巴細胞鑒定的抗原，SD抗原）不同，可相互刺激對方的T細胞發生增殖，此為雙向混合淋巴細胞培養；若將其中一方的淋巴細胞先用MitomycinC處理或射線照射使之細胞中DNA失去復制能力，但仍能刺激另一方淋巴細胞發生轉化，稱為單向混合淋巴細胞培養。兩個個體間HLA抗原差異程度越大，反應越強烈，可通過細胞數量、形態檢查或3H-TdR摻入率檢測反應細胞的增殖水平。如用經照射的、已知D位點抗原的純合子分型細胞作為刺激細胞，則

牛肉膏提取蛋白胨培養基實驗介紹2023/04/23

1.牛肉膏提取蛋白胨培養基是使用比較廣泛，常見的細菌基礎培養基之一，有時也稱為普通培養基。它包含牛肉提取物，蛋白ept和氯化鈉。其中，牛肉提取物為微生物提供碳源和能源，磷酸鹽和蛋白and主要提供氮源，而氯化鈉則提供無機鹽。當制備固體培養基時，添加一定量的瓊脂作為凝結劑。瓊脂在96℃下以常用濃度溶解。通常，將其與石棉網在沸水浴中或沸水浴中煮沸，以防止瓊脂燃燒。瓊脂在40°C下固化，通常不會被微生物分解。固體培養基中瓊脂的含量根據瓊脂的質量和溫度而變化。2.由于這種培養基主要用于培養細菌，因此有必要

連接產物純化的步驟簡單介紹2023/04/21

1．需要將連接產物轉移至一1.5mlEppendorf移液器管中，加入下列試劑:10μlofddH2O、2μlof3MNaAC（PH5.2）、50μlof無水乙醇、輕輕混勻，稍微離心并將其置于-20℃放置1小時以上；2.4℃，topSpeed離心30分鐘；3.小心移去上清液，避免接觸到管底的沉淀物；4.需要加入500μl70%的乙醇，輕輕顛倒幾次洗滌沉淀（注：不要離心混勻）；5.4℃，topSpeed離心5分鐘；6.小心移去上清液，將此Eppendorf移液器管置空氣中直至無乙醇氣味；7.加入1

TRIzol RNA提取操作步驟2023/04/20

1.樣品處理：培養細胞：收獲細胞1-5×107，轉移1.5ml離心管在其中，加入1mlTrizol，混合均勻，在室溫下靜置5分鐘。組織：取50-100mg組織（新鮮或-70℃，組織保存在液氮中）置于1.5ml離心管中，加1mlTrizol充分勻漿，在室溫下靜置5min。2.加入0.2mlCHCl3，振搖15s，靜置2min。3.4℃離心12000g×15min，取上清液。4.加入0.5ml異丙醇，將試管中的液體輕輕混合，然后在室溫下靜置10分鐘。5.4℃離心12000g×10min，棄去上清液。

RNA的免疫共沉淀分離及檢測實驗原理2023/04/18

非編碼RNA的發現使得RNA領域再次成為了生命科學研究關注的焦點。因為RNA是一種不穩定的生物大分子，絕大多數的RNA都需要與特定的RNA結合蛋白質結合形成RNA/蛋白復合物才能穩定存在于細胞中；不僅如此，RNA與RNA結合蛋白之間的動態關聯貫穿和伴隨了RNA的轉錄合成、加工和修飾、胞內運輸和定位、功能發揮及降解的整個生命循環。鑒于此，利用RNA結合蛋白分離或發現鑒定功能性RNA分子是RNA研究領域中一個不能缺少的研究方法。簡單地說，就是利用RNA結合蛋白的抗體免疫沉淀RNA/蛋白復合物，再從沉

鹽析法-多用于各種蛋白質和酶的分離純化2023/04/17

蛋白質溶液中加入大量的中性鹽以破壞蛋白質的膠體穩定性而轉移析出，這種方法稱為鹽析。常用的中性鹽有硫酸銨，硫酸鈉，氯化鈉等。鹽析時所需的鹽濃度及pH值不同，故可用于對混和蛋白質組分的分離。例如用半飽和的硫酸銨來沉淀出血清中的球蛋白，飽和硫酸銨可以使血清中的白蛋白，球蛋白都沉淀出來，鹽析出沉淀的蛋白質，經透析除鹽，仍保證蛋白質的活性。調節蛋白質溶液的pH至等電點后，再用鹽析法則蛋白質沉淀的效果更好。鹽析法分為兩類，第一類叫Ks分段鹽析法，在一定PH和溫度下通過改變離子強度實現，用于早期的粗提液；第二

對流免疫電泳實驗的操作步驟2023/04/11

1.瓊脂平板的制備可以根據需要選擇大玻璃平板和小玻璃載玻片。大玻璃板需要約10毫升的瓊脂，小玻璃片需要約3.5毫升。固化后打孔。該方法與瓊脂擴散實驗相同。2.添加樣品：在左孔中添加患者血清（原始血清和10倍稀釋血清各占據一個孔），在右側添加抗血清，每片均應有陽性對照。3.電泳操作流程：在電泳槽高度的三分之二處添加0.05mPH8.6Barbita酸鹽緩沖液。請注意，兩個水箱中的液位盡可能高。將帶有樣品的玻璃板放在電泳槽上，將抗原端連接到負極，將抗體端連接到正極過濾紙浸濕后作為鹽橋，過濾紙與瓊脂板

染色體Q顯帶實驗注意事項2023/04/10

1.熒光染料染色后，必須正確掌握分色時間，這是Q頻段是否清晰的關鍵，如果熒光太弱，則可以小心地取下玻璃蓋，并用熒光染料重新染色，然后順序分離顏色，蓋膜，如果熒光太強且帶狀圖案不清晰，請取下蓋玻片，然后再次將其放在緩沖液中一分鐘。2.Q傳送帶的膠片年齡不應太長，通常在一周內。3.褪色后，熒光染色膜仍可用于G波段染色，可以將熒光褪色在pH6.0緩沖液中浸泡12至24小時，然后干燥以備后用。4.使用熒光顯微鏡時，根據光源可分為兩種，通常，直接下降類型更好，由于直接落下的光源來自目鏡和物鏡之間，并且物鏡

6孔板轉染細胞實驗步驟2023/04/07

1.轉染前一天接種細胞于6孔板，5×104每孔，第二天轉染時細胞匯合度達到60%-70%每孔。2.轉染前半小時將完、全培養基換無血清培養基1.9ml。3.A液：RNA100pmol/DNA2μg（根據核酸類型不同，用量不同）加入50ulOpti-MEM無血清培養基，輕輕混勻，室溫靜置5min。4.B液：脂質體使用前輕輕混勻，脂質體5ul加入50ulOpti-MEM無血清培養基，輕輕混勻，室溫靜置5min。5.B液加入到A液中，用槍輕輕混勻，室溫靜止20min。6.將混合液均勻分散慢慢滴加到6孔板

分離植物細胞質壁原理2023/04/06

分離植物細胞質壁實驗過程中，當外部溶液的濃度大于細胞液的濃度時，根據擴散原理，水將從細胞液中滲入到外部溶液中，并且由于滲透作用而流失的水會導致細胞壁和原生質層收縮到一定程度。由于原生質層比細胞壁更具柔韌性，因此當細胞繼續失水時，原生質層將逐漸與細胞壁分離，即，逐漸發生質體分離。相反，如果外部溶液的濃度大于細胞液的濃度，則細胞將通過滲透作用吸收水分，整個原生質層將緩慢返回其原始狀態，從而使植物細胞將逐漸經歷溶質化和恢復。

凍干培養細菌介紹2023/04/04

冷凍干燥，也稱為凍干或冷凍干燥，是在產品冷凍后除去水分并將其置于真空中的過程。這使得冰可以從固體變為蒸汽，而無需經過液相。冰（或其他冷凍溶劑）通過升華過程從產品中可以去除，是結合水分子通過解吸過程去除。常用細菌培養基：肉湯培養基和普通瓊脂培養基，LB培養液，TSB培養液，TSA培養基等，FT培養液，TSC培養基，培養基，血瓊脂平板。什么情況下適合冷凍干燥:長期保存細菌、真菌、酵母或其他微生物培養物的最佳方法之一是使用冷凍干燥過程。這一簡短的實驗室程序可以與任何商用冷凍干燥器一起進行，以保存培養物

脫鹽的簡單介紹2023/04/03

寡核苷酸合成后，為了純化寡核苷酸成為天然的DNA結構，首先必須去除保護基團。通過濃ammoniumhydroxide處理，合成的寡核苷酸從固相載體上分離，2-氰乙氧基--磷酸二脂鍵的保護基團，以及堿基的保護基團基（苯甲?；彤惗』┍蝗コ?，從而形成了天然的DNA結構。然而，必要的去保護步驟完成后，寡核苷酸混合物還包含幾種必須被去除的小分子有機化合物。所有非必須有機化合物被移除的過程通常叫做脫鹽。脫鹽純化可以借助反向硅膠柱進行。盡管脫鹽純化可以移除所有的非必須有機雜質，但它不能有效移除合成中產生微

原位雜交組織化學實驗操作步驟簡單介紹2023/03/28

組織取材：組織取材應盡可能新鮮。由于組織RNA降解較快，所以新鮮組織和培養細胞最好在30min內固定。固定目：①保持細胞結構；②最大限度地保持細胞內DNA或RNA的水平；③使探針易于進入細胞或組織。常用的固定劑是多聚甲醛，與其它醛類固定劑（如戊二醛）不同，多聚甲醛不會與蛋白質產生廣泛的交叉連接，因而不會影響探針穿透入細胞或組織。增強組織的通透性和核酸探針的穿透性：稀酸處理和酸酐處理：為防止探針與組織中堿性蛋白之間的靜電結合，以降低背景，雜交前標本可用0.25%乙酸酐處理10min，經乙酸酐處理后

考馬斯亮藍染色法的突出優點介紹2023/03/27

1.靈敏度高：估計約為Lowry方法的四倍，他的較低蛋白質檢測量達到1mg。這是因為蛋白質和染料的組合所產生的顏色變化很大，并且蛋白質-染料復合物具有更高的消光系數，因此光吸收值隨蛋白質濃度的變化比Lowry方法大得多。2.測量快速簡便：只需添加一個試劑。只需約5分鐘即可完成樣品的測定。由于染料和蛋白質結合的過程，只需約2分鐘即可完成，其顏色可在1小時內保持穩定，并且顏色穩定性在5分鐘至20分鐘之間較佳。因此，不需要像Lowry方法那樣耗時且嚴格的時間控制。3.干擾物質少：例如Tris緩沖液，糖

簡單介紹質粒DNA提取實驗操作步驟2023/03/24

1.細菌繁殖：LB培養基，2ml/20ml，37℃，200rpm，搖動過夜；2.離心10分鐘，轉速為5000rpm，4°C；丟棄液體；3.用預冷的TES緩沖液洗滌沉淀物（細胞），在4°C下以10rpm，5000rpm離心10分鐘，加入預冷的1ml溶液I，并冰浴10分鐘；4.重懸，加入150ul溶菌酶母液，在室溫下靜置5分鐘；5.添加1.2ml的溶液II并在冰浴上保持5分鐘；6.加入0.9ml預冷的乙酸鉀，混合均勻，在4°C下以12000rpm離心10分鐘；7.加入1.5ml異丙醇，并將其放在-2