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細胞究竟怎么養？2024/05/13

細胞培養技術的廣泛應用讓我們對生命的奧秘有了更深一步的理解，同時也為醫學研究和臨床治療提供了重要支持。無論是研究者還是醫生，對細胞培養技術的掌握都是至關重要的，它們將開啟更多關于生命的精彩探索之旅。讓我們一起走進細胞的微觀世界，探尋其中的無限可能吧！01細胞復蘇和傳代1.1細胞復蘇將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。移入15ml離心管中，加入8ml預熱的1640wan全培養基，輕輕吹勻，離心，1000rpmX5min，棄上清液。加入8ml1640培養基清洗，棄上清液。加

傳代細胞培養2017/05/31

傳代細胞培養實驗原理：傳代細胞的培養使用已成功構建的細胞株，大量培養狀態良好的同種細胞，并維持細胞種的延續。傳代培養是細胞培養常規操作之一，也是所有細胞生物學實驗的基礎。傳代細胞根據細胞的生長習性可分為貼壁細胞和懸浮細胞。實驗流程：1.觀察培養基是否正常，細胞狀態如何，細胞密度如何，決定是否傳代。觀察時擰緊蓋子。2.加熱PBS、versene、培養基，(提前做好)瓶子不要倒著放，不要讓液體接觸到瓶塞。3.打開超凈臺(先開風機，后開照明)，用75%乙醇清潔臺面，點燃酒精燈。不要把廢液缸拿出去倒，如

熒光原位雜交原理及步驟2017/05/23

熒光原位雜交/FISH技術服務熒光原位雜交FISH的原理：熒光原位雜交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）的基本原理是用已知的標記單鏈核酸為探針，按照堿基互補的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行特異性結合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱軸呈線性排列，因而可以將探針直接與染色體進行雜交從而將特定的基因在染色體上定位。與傳統的放射性標記原位雜交相比，熒光原位雜交具有快速、檢測信號強、雜交特性高和可以多重染色等特點，因此在分子

蛋白質印跡的實驗原理、方法與步驟2017/05/16

蛋白質印跡的實驗原理、方法與步驟實驗原理WesternBlot（蛋白質印跡或免疫印跡）技術，以蛋白質為檢測對象，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。實驗采用聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）將樣品蛋白質分離，再轉移到固相載體（PVDF尼龍膜或NC膜）上；固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變；然后以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與其對應的抗體（一抗）發生免疫反應，特異性一抗再與和酶耦聯的第二抗體反應，zui后在酶的作用下，導致底物顯色或化學發光顯影，來檢測

流式細胞技術實驗方法2017/05/02

流式細胞技術實驗方法PI染色操作步驟1、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中，離心，1500rpm,5min，棄上清液。2、加入PBS1ml離心洗滌1次，棄上清。3、加入2ml預冷的70%酒精，4℃固定30min，或是-20℃固定過夜。4、離心，棄上清液。5、用1×PBS1ml洗滌1次，離心。6、加入RNaseA(工作濃度20ug/ml)于500ul1×PBS中，37℃孵育30min，離心。7、用1×PBS1ml洗滌1次，離心。8、加入PI(工作濃度50ug/ml)于500ul1×PBS中，室溫避

ELISA 原理與類型2017/04/24

1.ELISA的原理ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物

免疫組化的標準步驟2017/04/17

免疫組化步驟（ABC法）1。4%多聚甲醛常規灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中過夜。蠟塊制作。切片，貼片。0.01MKPBS清洗5min×3后；2。加入配好的0.3%的過氧化氫甲醇溶液（甲醇80ml＋0.01MKPBS100ml＋30%過氧化氫）30min，以消除內源性過氧化物酶的影響，0.01MPBS清洗5min×3；3。加入配好的0.3%TritonX100（30%TritonX100＋0.01MKPBS100ml）30min，以增加細胞的通透性，0.01MKPBS清洗5min×3；

流式細胞術中熒光補償該如何調節？2017/04/10

在討論流式細胞術中熒光補償該如何調節的問題前，我們先了解下流式實驗為何需要調補償？熒光分子在被激發后都會發射特定波長范圍的光，但是這些熒光的發射光之間會發生光譜重疊。熒光補償的調節是糾正熒光素發射光譜重疊的過程，即從一個被檢測的熒光信號中減掉溢漏過來的其他光。熒光發射光光譜重疊示例：以FITC和PE為例來看光譜重疊。FITC單染管的熒光會部分漏到PE通道中，而這部分需要從PE通道中減掉溢漏過來的FITC熒光。那么熒光補償該如何調節呢？?調節電壓?檢測熒光通道的自發熒光?每個熒光通道做單染管對照檢

PCR技術操作步驟2017/04/05

PCR實驗步驟典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應組成一個循環，通過多次循環反應，使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是：將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復性溫度下分別與目的基因兩側的兩條單鏈互補結合，兩個引物在模板上結合的位置決定了擴增片段的長短；耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補

諾華CAR- T療法今日獲美國FDA優先審評資格2017/04/01

3月29日，諾華宣布美國FDA已為其CAR-T療法CTL019（tisagenlecleucel-T）的生物制劑許可申請頒發了優先審評資格。這意味著諾華CAR-T生物制劑許可申請的審批流程有望得到進一步的縮減。CTL019zui初由賓夕法尼亞大學開發。2012年，諾華與賓夕法尼亞大學達成合作協議，共同研究、開發與商業化包括CTL019在內的多項CAR-T療法，用以癌癥治療。目前，CTL019申請上市的適應癥為兒童或年輕人中復發或難治性的急性B細胞型淋巴性白血?。˙-cellacutelympho

細胞株和細胞系的區別2016/06/28

人教版（2002年審定通過的全一冊）高中生物教材中細胞株和細胞系的概念內涵與浙科版的概念內涵不同甚至*相反。人教版2004年審定通過的《現代生物技術專題》高中教材就沒有出現這二個概念。據資料記載是因為這二個概念一度混用，導致概念不清。人教版高中生物細胞株概念強調結束原代培養并可以進行傳代培養的細胞群，并不強調細胞群的純度；浙科版的細胞株概念強調細胞群的純度，認為細胞株是克隆的結果。人教版高中生物細胞系概念強調這些細胞已發生部分遺傳物質的改變，帶有癌變的可以傳代培養的細胞群；浙科版的細胞系概念強調

免疫熒光技術操作步驟2015/11/24

一.直接免疫熒光法測抗原基本原理將熒光素標記在相應的抗體上，直接與相應抗原反應。其優點是方法簡便、特異性高，非特異性熒光染色少，相對使用標記抗體用量偏大。試劑與儀器磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4熒光標記的抗體溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS進行稀釋緩沖甘油：分析純無熒光的甘油9份+pH9.20.2M碳酸鹽緩沖液1份配制搪瓷桶三只（內有0.01mol/L，pH7.4的PBS1500ml）有蓋搪瓷盒一只（內鋪一層浸濕的紗布墊）熒光顯微鏡玻片架濾紙37℃溫箱等。

細胞傳代的一般方法2015/10/16

開始細胞傳代前，仔細檢查細胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全：一般主要有：細胞(單層細胞，鏡檢適合)、培養液(MEM-0.2%LH培養液或MEM培養液或199等適合細胞有要求的培養液)、滅活小牛血清、慶大霉素溶液（1萬單位）、7.5％NaHC03溶液、0.25％胰蛋白酶、PBS洗液。用具：小方瓶(100m1)、克氏瓶、膠塞、吸管(10ml、1m1）、細胞吹打管（20ml）(以上用具需經121℃至少15分鐘高壓滅菌)C02孵箱、超凈臺、倒置顯微鏡、4℃、—20℃冰箱操作步驟：鏡檢細胞，挑選生長狀態良好

影響細胞生長的幾點因素2015/09/15

一、溫度：一般哺乳類及禽類細胞體外培養的適宜溫度是37~38℃.溫度過高或過低都會影響到細胞的生長.細胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強,在低溫下,細胞的代謝活力及核分裂降低.溫度低于0℃時,雖影響細胞代謝,但并無傷害作用.把細胞置于23~25℃時,細胞仍能生存和生長,但速度減緩,不過,魚類細胞的適宜培養溫度為23~25℃.若溫度過低,在降到冰點以下時,細胞因胞外水和胞質結冰而受損死亡,但若向培養基中加入甘油或二甲基亞砜（DMSO）等保護劑,封入安瓿中后,置于液氮或低溫冰箱（-70℃）中,可起保護作

警惕化學藥物篩選中的假陽性藥物2015/05/14

新藥開發領域炙手可熱，大量研究人員蜂擁涌入。但是，當中很多人缺乏應有的引導，科研也做成了一團漿糊。每當生物學家們發現一個與疾病相關的靶點蛋白，他們就會想方設法尋找能夠與這個蛋白質分子結合并影響其活性的化合物，這些有苗頭的化合物常被稱為“活性化合物”。一次典型的藥物篩選流程能夠找到數千種活性化合物，它們可以作為疾病機理研究的工具，也是尋找新藥的基礎。但是，在篩選試驗中，很多化合物展現出來的“活性”僅僅是一種假陽性結果——它們的“活性”并不是基于化合物分子與蛋白質之間特異性的作用。真正的藥物能夠作用

免疫細胞去向的一種全新機制2014/06/24

中科院上海生物化學與細胞生物學研究所陳劍峰研究組在的一項研究中，揭示了決定免疫細胞去向的一種全新機制。6月19日，相關研究成果在線發表于《發育細胞》。免疫系統是人體內的一套奇妙的保護系統。它不但負責抵御外界細菌、微生物、病毒等的入侵，還負責清除體內衰老、損傷、死亡以及發生癌變的自身細胞。確保免疫細胞在特定的時空遷移到人體內的特定組織和器官是保證免疫系統發揮正常功能的關鍵步驟。否則，人體會出現自身免疫疾病甚至癌癥等嚴重疾病。但困擾科學家的是，免疫細胞是如何決定其在人體內的去向的。在陳劍峰研究員的指

國內*宮頸癌疫苗進入三期臨床試驗2014/05/28

國內*個、第三個宮頸癌疫苗產業化項目將在廈門海滄問世，宮頸癌疫苗現已進入三期臨床試驗觀察階段。廈門萬泰滄海生物技術有限公司II期基地在位于海滄的廈門生物醫藥港奠基，宮頸癌疫苗產業化項目在此問世，并將于2018年前投產。該基地占地67834.644平方米，是對I期研發、生產基地的擴展延伸。據介紹，II期基地將立足戊肝疫苗、宮頸癌疫苗、醫療器械、抗體藥物等創新產品的研發和生產，產品起點高，技術設備*，國內同行業水平。據悉，廈門萬泰滄海生物技術有限公司是福建省*一家疫苗生產企業，2005年成立，200