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豬血清IgG的純化
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(1)透析脫鹽
將上述IgG粗品溶于少量生 將上述IgG粗品溶于少量生 IgG 理鹽水后裝入透析袋,懸于裝有 理鹽水后裝入透析袋, 0.01mol/L,pH7.4的PBS的大燒0.01mol/L,pH7.4的PBS的大燒 杯中,于磁力攪拌器上4℃透析 杯中,于磁力攪拌器上4℃透析 4℃ 24h, 6h換一次液。24h,每6h換一次液。 換一次液纖維素離子交換層析純化IgG (2)DEAE-52纖維素離子交換層析純化 ) 纖維素離子交換層析純化取2g預處理的DEAE-52纖維素、裝成1.5×30cm,柱床高 2g預處理的DEAE-52纖維素、裝成1.5×30cm, 預處理的DEAE 纖維素 1.5 25cm層析柱 層析柱。 25cm層析柱。 緩沖液A(25mmol/L Tris-HCl,pH8.8, 緩沖液A(25mmol/L Tris-HCl,pH8.8,35mmol/L NaCl) 平衡。
取2mL上述透析去鹽母液進層析柱,上樣后先用緩沖液A 2mL上述透析去鹽母液進層析柱,上樣后先用緩沖液A 上述透析去鹽母液進層析柱 平衡,至流出液在280nm波長洗脫曲線變得平直止。 280nm波長洗脫曲線變得平直止 平衡,至流出液在280nm波長洗脫曲線變得平直止。 以等量緩沖液A和緩沖液C(25mmol/L Tris-HCl,pH8.8, 以等量緩沖液A和緩沖液C(25mmol/L Tris-HCl,pH8.8, NaCl)連續梯度洗脫;控制流速1mL/min 連續梯度洗脫 1mL/min。 500mmol/L NaCl)連續梯度洗脫;控制流速1mL/min。
上樣15min后分步收集并記錄波峰,2mL/管 上樣15min后分步收集并記錄波峰,2mL/管,合并同一波 15min后分步收集并記錄波峰 峰收集管。再用PBS溶液透析,并進行分析鑒定。 PBS溶液透析 峰收集管。再用PBS溶液透析,并進行分析鑒定。
豬血清
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